無菌產(chǎn)品的高風(fēng)險潔凈區(qū)一旦發(fā)生微生物監(jiān)測超標(biāo)或是長霉菌，將對無菌產(chǎn)品的無菌保障帶來極大的風(fēng)險。為此，首先需要分析可能導(dǎo)致微生物監(jiān)測超標(biāo)的人、機(jī)、料、法、環(huán)等各環(huán)節(jié)是否引入污染風(fēng)險，其次如果能找到確定的污染來源及原因當(dāng)然是最好的結(jié)果，但往往居于微生物污染的不可重現(xiàn)性和隨時間推移找到的證據(jù)鏈越來越渺茫，這時就得針對可能引入污染的各種途徑采取有效的切斷措施，并對可能的人員、區(qū)域、水、環(huán)境和物體表面加強(qiáng)清潔消毒，以避免造成后續(xù)無菌風(fēng)險沒有控制和消除。下面就根據(jù)風(fēng)險分析的魚骨圖工具對人、機(jī)、料、法、環(huán)存在風(fēng)險進(jìn)行頭腦風(fēng)暴，并對風(fēng)險要素一一分析，分享如下：
1、人員
2、機(jī)器
3、物料
4、方法
5、環(huán)境
1、人員“無菌操作
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一是分析人員無菌操作的規(guī)范性，可通過回放AB級核心區(qū)人員的提供操作視頻，如是否動作幅度過大、過快，是否有經(jīng)常人員手部在瓶子上方跨躍操作，是否干擾動作過多，如加膠塞或加藥粉動作不規(guī)范等；
二是開RABS門次數(shù)較多，是否有炸瓶處理，是否灌裝不順經(jīng)常開門干預(yù)；
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三是人員手動裝機(jī)是否動作過于復(fù)雜、裝機(jī)時間過長，物料如原輔料、瓶子、膠塞等傳送過程中人員處理不規(guī)范，是否清潔消毒到位；
四是人員在AB級核心區(qū)的設(shè)備清潔消毒、墻面地面天花板等清潔是否按規(guī)定的SOP程序規(guī)范執(zhí)行，有沒有該清潔到的則遺漏了，有沒有本應(yīng)清潔三遍的結(jié)果只草草清潔了一遍等。
2、更衣
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回顧人員是否參與無菌操作更衣的更衣確認(rèn)是合格，直接提供操作人員是否參與過培養(yǎng)基模擬灌裝驗證，是否進(jìn)入AB級核心區(qū)的部分人員近期有過表面微生物監(jiān)測超趨勢或超限度。檢查無菌手套、胡須罩、眼罩、口罩等是有破裂，消毒乙醇是否有異常，無菌服是否滅菌正常，人員在更衣過程是否規(guī)范無異常。按規(guī)定進(jìn)入潔凈區(qū)的人員應(yīng)對手部進(jìn)行清洗、干燥和消毒，人員是否均規(guī)范做到位。車間管理人員還應(yīng)加強(qiáng)更衣規(guī)范性檢查與控制。
3、個人衛(wèi)生
調(diào)查進(jìn)入AB級核心區(qū)人員個人衛(wèi)生狀況，是否勤洗澡、勤洗頭發(fā)、勤換衣服、勤剪指甲，是否按規(guī)定不化妝、不配戴飾物，身體有傳染病、傷口或感冒應(yīng)主動報告并評估是否能允許進(jìn)入潔凈核心區(qū)內(nèi)，人員是否有每年至少一次的健康體檢。如果員工住單位宿舍，也可順便在檢查房間衛(wèi)生時檢查是否房間干凈整潔，衣物是否勤換洗，是否有霉味。如果個人衛(wèi)生不注意，有可能帶到車間內(nèi)導(dǎo)致微生物或霉菌污染，特別在南方的梅雨季節(jié)，要制訂防霉、防潮管理程序并嚴(yán)格執(zhí)行。
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4、培訓(xùn)
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應(yīng)該經(jīng)常對員工進(jìn)行微生物、無菌操作規(guī)范的培訓(xùn)，人員更衣確認(rèn)和參加培養(yǎng)基模擬灌裝驗證要嚴(yán)格要求，新員工進(jìn)入AB級核心區(qū)必須是考核合格的，所有進(jìn)入潔凈核心區(qū)的提供、QA、QC、維修等人員均應(yīng)嚴(yán)格遵守AB級核心區(qū)的規(guī)范管理制度。人是最大污染源，人員的無菌操作保障意識和實操要不斷練習(xí)和提高相應(yīng)水平。培訓(xùn)不能流于形式，不能遺漏或考核放水，無菌產(chǎn)品人命關(guān)天，來不得半點馬虎。
二、機(jī)器
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1、衛(wèi)生死角
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AB級核心區(qū)內(nèi)有些衛(wèi)生死角可能導(dǎo)致微生物的污染，應(yīng)該積極排查。比如，一是有些不能滅菌的部件或物品，如隔離器手套、稱重天平、灌裝機(jī)的部分非金屬部件或墊圈墊片、吸膠塞星輪、檔板等，還有原料桶外表面和監(jiān)測用培養(yǎng)碟；二是如灌裝機(jī)下面的技術(shù)夾層的設(shè)備部件或機(jī)臺下表面是否無菌，可取樣測無菌；三是回風(fēng)道、地板、人員鞋底、層流小車密封部件等；四是否有廠房沒有密封的小孔、小洞、裂縫，如燈具是否夾層漏水、漏氣等。
2、設(shè)備順應(yīng)性
有時提供過程中干預(yù)動作過大、頻次過多會增加微生物的污染風(fēng)險。如灌裝時經(jīng)常破瓶，倒瓶，卡塞掉塞，設(shè)備故障停機(jī)，灌裝量不穩(wěn)等，為處理如停機(jī)等異?；蚬收?，這會增加人工去干預(yù)的機(jī)會，如夾子處理倒瓶炸瓶，手套會跨躍到敞口瓶子的上方，又如搞不定故障時還會增加開RABS門的機(jī)會等。有些操作動作也會增加風(fēng)險，如調(diào)壓塞，刮粉，多次調(diào)裝量等。這些都應(yīng)在批記錄中進(jìn)行詳細(xì)的記錄，以便在出現(xiàn)產(chǎn)品污染時可以追溯加以調(diào)查分析。
3、環(huán)境監(jiān)測儀器
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有時離線的粒子計數(shù)器也會帶來微生物的污染。比如是剛從其它車間轉(zhuǎn)過來的，傳遞時是否充會外表面消毒，是否清潔干凈，儀器是否有伴隨微生物污染的其它風(fēng)險。平時使用完后，是否按程序進(jìn)行清潔消毒，車間員工是否因為是QC的儀器就偷懶或干碎不去清潔，如不移出會放AB級核心區(qū)的哪個位置，是否有引進(jìn)微生物污染的其它風(fēng)險。
4、洗干衣機(jī)
洗衣雖然是清潔衣服的重要環(huán)節(jié)，但如洗干衣機(jī)日常管理不到位，也是有可能引入風(fēng)險。一是排水閥、過濾網(wǎng)是否定期拆下來清洗，是否是復(fù)雜的滾筒或洗干一體機(jī)，是否洗衣結(jié)束后會開啟晾干，是否會有積水在洗衣機(jī)底部而滋生微生物，針對此環(huán)節(jié)可增加用清毒液定期清洗洗衣機(jī)等有效措施，如D級和D級以上潔凈區(qū)洗衣機(jī)至少每兩月用洗衣機(jī)機(jī)槽清潔劑清潔一次和使用消毒劑浸泡消毒洗衣機(jī)一次，梅雨季節(jié)縮短到每月一次。
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三、物料
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1、原輔料
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原料、輔料的無菌或微生物限度需要調(diào)查分析，是否物料本身帶入的。是否會在傳遞過程中帶入風(fēng)險，如無菌分裝藥粉的外桶是否清潔消毒到位，所使用消毒液是否除菌過濾。另外，檢查藥粉桶外、內(nèi)蓋，是否有松動、不密封情況，是否取樣后密封完全，會不會在取樣環(huán)節(jié)引入污染風(fēng)險。
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物料可分三個方面進(jìn)行管理：一是接收物料的管理。接料人員接收物料時，應(yīng)檢查物料是否有長霉菌，或外包裝破損應(yīng)拒絕接收。二是物料使用過程的管理。提供車間使用原輔料前，應(yīng)先確認(rèn)環(huán)境的溫濕度符合潔凈室控制要求，方可打開原輔料包裝。另外，原輔料的使用過程，要及時扎好原輔料包裝袋袋口，防止剩余原輔料吸潮和霉變。退回倉庫的原輔料應(yīng)有雙層塑料袋包裝。三是存放物料的管理。首先，提供車間存放物料的管理。潔凈區(qū)應(yīng)不能存放過多物料，防止造成衛(wèi)生死角，每工作日應(yīng)當(dāng)對存放的物料進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)物料受潮或霉變，應(yīng)啟動偏差程序，并即時將物料轉(zhuǎn)移出潔凈區(qū)，使用殺孢子劑溶液對環(huán)境進(jìn)行強(qiáng)化消毒處理，以防污染菌擴(kuò)散污染其他物料。其次，倉庫存放物料的管理。倉管人員應(yīng)抽查各個庫區(qū)物料情況，規(guī)定定期抽查物料儲存狀況。梅雨時節(jié)應(yīng)加強(qiáng)巡檢，若發(fā)現(xiàn)受潮或霉變物料，應(yīng)啟動偏差程序，并即時將物料轉(zhuǎn)移隔離，經(jīng)QA確認(rèn)后按照不合格品進(jìn)行處理。
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2、消毒劑
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調(diào)查使用消毒劑的種類，是否每月交替使用不會產(chǎn)生耐藥。消毒劑是否在有效期內(nèi)，可能在過濾或傳遞環(huán)節(jié)過程中被污染。過濾的濾芯完整性是否檢查，過濾裝配過程、過濾過程是否規(guī)范。消毒劑的濃度、效力、殺菌范圍是否經(jīng)過驗證。消毒劑本身是否存在各種類微生物，是否微生物負(fù)荷就很高，微生物、內(nèi)毒素等安全性指標(biāo)有在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中做內(nèi)控規(guī)定到位。霉雨季節(jié)，需要用殺孢子劑溶液加強(qiáng)消毒，避免霉菌滋生。
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3、清潔工具
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一般AB級核心區(qū)內(nèi)的清潔工具較為簡單，如絲光手巾、不銹鋼盤、T字不銹鋼架、酒精噴壺等，檢查清潔工具是否清洗干凈，是否滅菌，拆開是否完整，傳遞是否規(guī)范，噴壺內(nèi)酒精有無被污染，清潔過程是否嚴(yán)格按SOP操作，絲光手巾沾洗消毒液是否到位，員工在清潔機(jī)臺、設(shè)備、墻、地面、天花板等區(qū)域是否規(guī)范等。
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4、培養(yǎng)碟
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培養(yǎng)碟有沉降菌、浮游菌、表面微生物碟，需要檢查使用的培養(yǎng)碟是否在效期內(nèi)，從QC如何傳遞到車間的，是否有放置過夜情況，傳遞過程中是否檢查外包裝的完整性，無漏氣無破裂，放置在緩沖間或傳遞窗中的溫度是否有保證，使用前是否檢查有無冷凝水，從外圍一級一級傳入AB級核心區(qū)內(nèi)，是否按程序脫包，是否按程序進(jìn)行外表面清潔消毒到位，在潔凈區(qū)內(nèi)拆包使用時是否規(guī)范，開蓋監(jiān)測是否按規(guī)范操作，收碟時也按要求進(jìn)行。最后分析調(diào)查沉降菌、浮游菌、表面微生物監(jiān)測結(jié)果，是否環(huán)境、表面等符合相應(yīng)級別的標(biāo)準(zhǔn)，是否有超標(biāo)、超警戒限、行動限、超趨勢的情況，分析對微生物的污染的要關(guān)性。
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5、過濾器
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非終端滅菌的產(chǎn)品，如凍干或水針，往往會有兩道0.2цm的過濾器，微生物污染有沒有可能兩道過濾器漏了，可經(jīng)過回顧過濾器是否完整性檢漏通過了，有沒有可能過濾器的濾芯裝反了，有沒有可能過濾器的離線或在線的高壓滅菌出問題了。還有是否可能洗瓶子高溫燧道滅菌的空氣過濾器不完整，或是沖氮產(chǎn)品的氮氣過濾器出問題了，有沒有可能凍干機(jī)的壓縮空氣或沖氮過濾器有不同程度的泄露?？傊?，無菌提供中直接接觸產(chǎn)品的過濾器要一一調(diào)查分析，不漏過一個隱患。
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6、無菌手套
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無菌手套也是主要影響因素之一，一是人員更衣使用的無菌手套，另一個是RABS的手套。首先，更衣無菌手套要對供應(yīng)商進(jìn)行審計，追溯無菌手套是怎么提供出來的，國產(chǎn)的無菌手套往往并不是太好用，容易破裂。較好的一些無菌手套來自馬來西亞等東南亞國家，但來的手套怎么保證無菌性，大多數(shù)廠家是拉去鈷60照射，但其照射劑量是否經(jīng)過驗證，要追溯到前端的批照射記錄。無菌手套入廠后，要按要求取樣做無菌檢測，也算是多一道保障。另外，無菌手套是否會破裂，使用前要檢查包裝的完整性，但有些針眼的微漏是很難發(fā)現(xiàn)的，所以定期的檢漏也是必要的。有些手套會出現(xiàn)不同數(shù)量的白點或黑點，會不會導(dǎo)致滲漏，會不會掉下來可見異物顆粒污染產(chǎn)品，這也是要關(guān)注的。進(jìn)AB級核心區(qū)的無菌手套應(yīng)該是一次性的，重復(fù)使用不允許的。當(dāng)然，也會用到一些能濕熱滅菌的手套，但其使用時進(jìn)行操作會有些不太方便，如出現(xiàn)微生物污染，也得調(diào)查其滅菌過程是否異常。
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其次，RABS的手套也是要檢查其無菌性和完整性的，無菌可通過擦試進(jìn)行，RABS的手套往往伴隨車間整體消毒時進(jìn)行的手套消毒，有些材質(zhì)好的手套耐濕熱滅菌，有些則不耐，要區(qū)別處理。要制訂定期更換RABS的手套的周期，提供使用完需要切底的清潔消毒，為及時干燥消毒的手套，可用無菌壓縮空氣吹干或讓RABS手套均充分展開自然晾干，不能有沒展開的死角沒有干透，有水的死角是很容易滋生微生物的，所以也要做這方面的調(diào)查。
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7、工衣
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使用工衣是否符合GMP的不脫落纖維等材質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，是否確定工衣清洗、滅菌次數(shù)和更換周期，是否沒有破損、滲漏等，進(jìn)AB級核心區(qū)的工衣滅菌是否合格，工衣脈動真空和干燥程度如何，人員工衣進(jìn)行表面微生物監(jiān)測的結(jié)果，分析調(diào)查。梅雨季節(jié)，工作服的清洗需使用抗菌洗衣液，AB級是每班次一套不重復(fù)利用，C級區(qū)、D級區(qū)潔凈服是否至少每月滅菌一次，如果返潮工衣當(dāng)天應(yīng)重新清洗、干燥。
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8、注射用水
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無菌提供過程中使用到的注射用水，有配液用的物料，有清洗配液罐和凍干機(jī)的，還有配制消毒液用的。一是配液用的注射用水要對其使用點定時監(jiān)測，有些注射用水要需要貯存在罐內(nèi)進(jìn)行冷卻到工藝的溫度要求，如2-8℃或15℃左右，你想從80℃以上的高溫降低到這么低的溫度，這就需要驗證時冷卻時間和冷注射用水的貯存有效期，是否會貯存過程中超過過濾前的微生物負(fù)荷，這也是要考察的。配液用的注射用水量是否會超過過濾器的載量，導(dǎo)致無菌風(fēng)險，這也是要驗證的。二是清洗配液罐和凍干機(jī)的注射用水，進(jìn)行CIP的用水量是否合適，有沒有可能注射用水微生物負(fù)荷過高導(dǎo)致無菌風(fēng)險。三是配制消毒液用的注射用水，也要保證配制、過濾過程中的微生物負(fù)荷過高或是過濾后消毒液有無菌污染的風(fēng)險。這些環(huán)節(jié)都是要調(diào)查取樣的，排除注射用水不會污染到產(chǎn)品和環(huán)境。
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9、公用介質(zhì)
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無菌提供過程中使用到的公用介質(zhì)主要有壓縮空氣和氮氣，從氣體源頭開始調(diào)查，如使用外購罐還是空壓機(jī)或制氮機(jī)，進(jìn)到AB級核心區(qū)的管道是否有滲漏，使用的除菌過濾器是否在效期內(nèi)，濾芯完整性是否檢測，過濾后管道的無菌性怎么保證，過濾后氣體是否根據(jù)風(fēng)險定期監(jiān)測無菌性，如分裝無菌粉針劑時產(chǎn)品需要沖氮使用的過濾器，還有無菌凍干或水針過濾藥液用的過濾器，需要每批做濾芯完整性；有些如配液罐或凍干機(jī)等輔助過濾器，則定期測定濾芯完整性就可以了。